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為什么恒溫擴增可取代變溫PCR?

時(shí)間: 2024-05-28  


    依賴(lài)核酸序列的擴增技術(shù)(NASBA)是在PCR基礎上發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù),是由1對帶有T7啟動(dòng)子序列的引物引導的連續、等溫、基于酶反應的核酸擴增技術(shù),反應在41℃進(jìn)行,可以在2h左右將模板RNA擴增約109倍,比常規PCR法高1000倍,不需特殊的儀器。該技術(shù)一出現就被用于疾病的快速診斷和病人血清中HIV-1的定量檢測。盡管RNA的擴增也可以使用反轉錄PCR技術(shù)(通過(guò)反轉錄形成單鏈DNA模板),NASBA相比則有自己的優(yōu)勢:可以在相對恒溫的條件下進(jìn)行(一般恒溫為41℃)。該技術(shù)用于醫學(xué)診斷,相對傳統的PCR技術(shù)更為穩定,準確。

    多酶等溫快速擴增(Multienzyme lsothermal Rapid Amplification,MIRA)技術(shù),一種模擬生物體內正常核酸擴增過(guò)程,在37°C條件下依靠多種功能蛋白協(xié)同作用下實(shí)現核酸的快速擴增。

    以上是近年來(lái),隨著(zhù)分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展,基于核酸擴增的診斷方法已大量建立并廣泛應用于人類(lèi)疾病的實(shí)驗室檢測中,恒溫擴增技術(shù)便是其中一種,與其他的核酸擴增技術(shù)相比,恒溫擴增有快速、高效、特異的優(yōu)點(diǎn)且無(wú)需專(zhuān)用的設備,所以它一經(jīng)出現就被許多學(xué)者認為是一種有可能與PCR媲美的檢測方法。

    當前常見(jiàn)的等溫擴增技術(shù)有環(huán)介導等溫擴增技術(shù)、鏈替代等溫擴增技術(shù)、滾環(huán)等溫擴增技術(shù)、依賴(lài)解旋酶等溫擴增技術(shù)、依賴(lài)核酸序列等溫擴增技術(shù)、單引物等溫擴增技術(shù)和核酸快速等溫檢測放大等技術(shù)。為了更好地有選擇地開(kāi)發(fā)利用這方面技術(shù),現就這些等溫擴增技術(shù)的原理、特點(diǎn)及應用進(jìn)行簡(jiǎn)要總結。

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