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生化試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題

時(shí)間: 2024-06-03  

一、生化試劑盒的測定原理?


  生化試劑盒通過(guò)化學(xué)反應/酶促反應或物質(zhì)結構特點(diǎn)測定樣本中物質(zhì)含量或酶活;所用儀器一般為分光光度計和酶標儀,兩者的測定原理都是 朗伯比耳定律: A=kbc,即當適當波長(cháng)的一束平行單色光照射固定濃度均勻溶液時(shí),其吸光度與光通過(guò)的液層厚度成正比。土壤、水質(zhì)、動(dòng)植物組織、血清、細胞細菌、食品等 樣本均可以進(jìn)行測定。


二、如何選擇不同規格的試劑盒?


  首先根據本實(shí)驗的實(shí)際情況選擇,實(shí)驗室有酶標儀的且有該檢測波長(cháng)的可以選擇微量法試劑盒;實(shí)驗室有分光光度計的,且有相應規格的比色皿既 可以選擇常量法也可選擇微量法試劑盒。建議購買(mǎi)前先閱讀的說(shuō)明書(shū),對其中自備的儀器和試劑進(jìn)行確認。


三、 收到試劑盒后如何保存?


  如果收到試劑盒,暫時(shí)不用,可按照外包裝上指示的溫度統一保存;拆開(kāi)包裝后,請按照每個(gè)試劑的保存溫度進(jìn)行保存,有些試劑忌反復凍融; 有些試劑為粉劑,溶解之后性質(zhì)不穩定。


四、試劑盒的有效期是多長(cháng)?


  一般生化試劑盒有效期為6個(gè)月,也有特殊貨號生化試劑盒有效期為1年;具體以實(shí)際收到貨物的標簽信息為準。


五、收到試劑盒后應該從哪一步做起?


  強烈建議客戶(hù)先拿出2-3個(gè)預期結果差別較大的樣本做預實(shí)驗。在實(shí)驗的過(guò)程中,首先將試劑盒中的說(shuō)明書(shū)通讀一遍, 檢查試劑盒中各成分的量與說(shuō)明書(shū)符不符合,溶解或使部分試劑回復至室溫,然后處理樣本,樣本提取完成后,再溶解一些粉劑,開(kāi)始實(shí)驗。

六、買(mǎi)了多個(gè)試劑盒,樣本只有很少可以只用一種提取液提取嗎?


  一般同一個(gè)系列的試劑盒中,酶活測定的提取液類(lèi)似,含量測定的提取液類(lèi)似。但具體的請具體查詢(xún)。


七、待測樣本必須是鮮樣的嗎?冷凍樣本是否可以用?


  新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數指標的測定,有一些生理活性物質(zhì)容易降解,建議用新鮮樣本測定, 如輔酶Ⅰ、輔酶Ⅱ、谷胱甘肽、線(xiàn)粒體復合體等。冷凍樣本建議在-70℃或者液氮中保存。一般樣本在4度能都 保存一周,-20保存一個(gè)月,-80保存3個(gè)月


八、土壤酶活性測定可以用鮮土嗎?


  由于土壤顆粒大小不一致導致水分含量不一樣,且取樣量較少,為了保證測定的重復性,建議將鮮土風(fēng)干并 過(guò)篩后取樣。若用鮮土測定,需保證樣本的顆粒大小一致水分含量相似,建議過(guò)40目篩后取樣,且同時(shí)測定 的樣本要保持一致,最好不要一組樣本用風(fēng)干土,一組用鮮土,風(fēng)干后的土樣在-20保存1個(gè)月測定大部分酶活 幾乎不會(huì )有損失;某些土壤的成分如硝態(tài)氮、銨態(tài)氮等在風(fēng)干過(guò)程中會(huì )發(fā)生顯著(zhù)變化,必須用新鮮樣品進(jìn)行分析。


九、樣本研磨的方法?


樣本研磨我們一般用到三種方法:

1.  將研缽置于冰盒上勻漿即冰浴勻漿,在勻漿的過(guò)程中注意勻漿器浸于冰中,防止因為摩擦引起的溫度過(guò)高,提取液可以在勻漿過(guò)程中或者勻漿后加入。 


2.  用液氮勻漿,液氮研磨前將樣本洗凈,盡量剪成小塊,放入研缽中,加入液氮研磨,液氮揮散后盡快加入第二次液氮直至研磨成粉末狀,避免其過(guò)程中 反復凍融,同時(shí)要做好保護措施,防止凍傷手指。完成后將粉末收集到離心管中加入緩沖液。樣本可以提前稱(chēng)量號也可研磨完后稱(chēng)量。 


3.  使用勻漿機進(jìn)行勻漿,將稱(chēng)好的組織放入離心管中,加入適量提取液,加入鋼珠。并將模塊提前遇冷,按照機器指示進(jìn)行操作。一般的動(dòng)物組織用 該方法效果尚可,有些機器對植物組織的處理效果不好。


十、測定前是如何調零?


  使用分光光度計的用戶(hù),用蒸餾水或相應的有機試劑直接調零。使用酶標儀的用戶(hù),可以在一個(gè)孔里加入200μL的蒸餾水或去離子水,作為調零孔, 也可不用調零,后續計算中會(huì )有空白孔。


十一、樣本如何稀釋或濃縮?


  樣本測定值若超出檢測范圍,可以將提取的上清液用提取液稀釋后重新測定。一般從高到低,按照2倍,5倍,10倍,20倍的順序,選擇一個(gè)合適的稀釋 倍數。樣本測定值若低于檢測范圍,可以提高樣本濃度,如稱(chēng)取0.2g樣本加入1mL提取液勻漿,相當于將樣本濃縮2倍。


十二、如何保證測定溫度?


1.  根據說(shuō)明書(shū)中測定溫度,提前打開(kāi)保溫設備(如水浴鍋),設到溫度,在達到溫度后,把冷藏的試劑轉移到保溫設備中保溫10-30分鐘以上,以保證反應一開(kāi)始,就在溫度中進(jìn)行。 


2.  對于擁有酶標儀的用戶(hù),直接提前預熱,在達到設定溫度后,可以直接把預熱后的試劑,加入酶標板,然后開(kāi)始反應。 


3.  在保溫設備(水浴鍋和金屬浴,最好是前者)進(jìn)行。注意提前對保溫設備進(jìn)行預熱,達到設定溫度后再進(jìn)行反應。但是僅適用于能夠終止的反應。 (4)對于瞬間完成的反應,或者對溫度不敏感的反應,為了提高重復性,最好在同一溫度下完成檢測。例如打開(kāi)空調,設定在室溫,如25℃。 當然,所有控溫設備,都要進(jìn)行預熱。


十三、 試劑盒有哪些常見(jiàn)規格?


1.  50管的試劑盒,常量法試劑盒,用分光光度計檢測。1mL的比色皿檢測。


2.  100管的試劑盒,微量法試劑盒,用酶標儀(酶標板)或者分光光度計(0.25 mL比色皿)檢測。


十四、試劑盒規格中是什么意思?


1.  50T/48S:50T指能夠做50次測定,48S指可以測試48個(gè)樣品。如果每個(gè)樣品重復測定3次,那么只能測定16個(gè)樣品。其中有2次測定用于空白管或者 對照管。值得特別注意的是,50T/24S中由于每個(gè)樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量?jì)H為8個(gè)(假設做3次重復) 


2.  100T/96S:100T指能夠做100次測定,96S指可以測定96個(gè)樣品,如果每個(gè)樣品重復測定3次,那么只能測定32個(gè)樣品。其中有4次測定用于空白管或 者對照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類(lèi)推。值得特別注意的是,100T/48S中由于每個(gè)樣品測 定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量?jì)H為16個(gè)(假設做3次重復)。


十五、試劑盒中含有干粉的試劑應該怎么稀釋保存?


  一般試劑為粉劑的,可能更多的考慮到配成溶液后的穩定性差,如NADH,或者和其他試劑溶解在一起會(huì )在不同的溫度下有其他的化學(xué)反應。 -20℃保存的粉劑建議溶解后分裝保存,避免反復凍融。

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